Tinción Gram: Preparación y tinción de las muestras

Aunque los microrganismos vivos se pueden examinar directamente con un microscopio óptico, a menudo hay que fijarlos y teñirlos para aumentar la visibilidad, acentuar las características morfológicas y conservarlos para su estudio en el futuro.

Fijación:

Las células teñidas que se observan en un microscopio deben parecerse lo más posible a las células vivas. La fijación es el proceso por el cual se conservan y fijan en su posición las estructuras internas y externas de las células de los microrganismos. Inactiva enzimas que podrían alterar la morfología celular y endurece las estructuras celulares, de manera que no cambien durante la tinción ni observación. Normalmente, durante la fijación se destruye al microrganismo y se fija firmemente al porta objetos.

Los bacteriólogos fijan con calor frotis bacterianos calentando suavemente con una llama una película de bacterias secada previamente al aire. Este método conserva adecuadamente la morfología general, pero no las estructuras internas de la célula.

Hay que utilizar la fijación química para proteger la subestructura fina y la morfología de microrganismos delicados de mayor tamaño. Los fijadores químicos penetran las células y reaccionan con componentes celulares, normalmente proteínas y lípidos, para inactivarlos y convertirlos en insolubles e inmóviles. Las mezclas comunes de fijación contienen sustancias como etanol, acido acético, cloruro mercurico, formaldehido y glutaraldehido.

Pasos para realizar la Tinción Gram:

PASO 1) Cristal violeta durante 30 segundos a 1 minuto. Aclarar con agua durante 2 segundos.

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PASO 2) Yodo (lugol) durante 1 minuto. Aclara con agua. 

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PASO 3) Lavar con etanol al 95% o acetona durante 10-30 segundos. Aclarar con agua.

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PASO 4) Safranina durante 30-60 segundos. Aclarar con agua y secar.

Bacterias Gram Positivas = Color Violeta

Bacterias Gram Negativas = Color Rojo o Rosado